並列タイトル等DNA Methylation and Human Endogenous Retroviruses Linking Genetic and Environmental Factors in the Pathogenesis of Psychiatric Disorders
一般注記科研費番号: 15591236
平成15年度～平成16年度科学研究費補助金（基盤研究（C)（2））研究成果報告書
研究概要：1.脳での転写活性能保持型内在性レトロウイルス(HERV)の探索と同定データベースの包括的探索法を確立し、約465万個のESTのうち脳関連組織のmRNAから作製されたEST約44万個を選別し、12ローカスを期待できるものとして抽出した。胎児脳から抽出したRNAを用いてこれらの潜在的転写活性能を検討した。その結果、HERVK9やMER61AなどのHERV配列をもつ6ローカス(3p22.1,5p15.3,4p16.3,4q31.3,1p36.13)を新たに同定した。データベースの包括的探索法は確立したが、検証の効率が悪く、マイクロアレイ等のパワフルな技術の導入が不可欠と思われる。 2.それらによる近傍遺伝子の発現制御への干渉のin vitroの系での検証前年度に、SYN3-exon13 (Ex.13)のアンチセンスRNAによる転写後発現抑制(PTGS)効果を確認している。今年度は、HERV-Hからのread-through転写物の存在とその効果を確認することが課題であった。これに必要な3種のコンストラクトを作製した。発現ベクターpGL3-basic(3.4kb)に、 HERV-H3'LTRからSYN3のEx.13までのゲノム配列(5.7kb)を挿入したもの、Ex.13を含まないもの(5.2kb)及びEx.13 を逆向きに挿入したもの(5.7kb)の3種である。現在、種々の細胞を用いて最も効率の良い細胞及び条件を検討中である。 3.HERV-Kメチル化の組織特異性および個人差の検討サザーン法により、HERV-K lociのメチル化の予備的検討を行った。サンプルは、白血球、(胎児)脳・肝臓・胎盤3例ずつ。組織及び個人間でのメチル化の程度に差が認められた。強い順に、白血球>脳>肝臓>胎盤であった。仮に3例の胎盤におけるメチル化が、A>B≧Cとすると、この関係は肝臓でも成り立っていた。
研究概要（英文）:(1)Comprehensive screening of EST database for human endogenous retroviruses(HERVs) with transcriptional potential in the brain and experimental confirmation of their activities Among 4.6-million ESTs, we selected 440 thousands that were prepared from various brain-related tissues and cell lines From the 440-thousand ESTs, we extracted 12 HERV loci that may have transcriptional activities. Finally we identified six out of the 12 HERVs by RT-PCR and subsequent cloning & sequencing analysis. (2)Investigation of an anti-sense RNA effect on nearby genes by HERV-read-through transcripts In a previous study, we identified two HERV loci belonging to HERV-H and HERV-K families. That HERV-H(22q12) was located about 4 kb downstream of the SYN3 gene in the reverse orientation. To investigate an anti-sense RNA effect on SYN3 of the HERV-H read-through product, we constructed three expression vectors containing a genomic sequence from the 3'LTR of the HERV-H to the last exon of SYN3, the same genomic sequence except the last exon being reversed, and no sequence of the exon. Experimental conditions are being examined to obtain the best result. (3)A preliminary study on HERV-K methylation Methylation states of the HERV-K family were examined by Southern blot hybridization using a methylation sensitive enzyme. Materials were peripheral leukocytes, fetal brain, fetal liver, and placenta from three different individuals. Although almost loci were heavily methylated, difference of methylation states was observed between tissues and between individuals. The methylation states were higher in the following order : peripheral leukocytes>brain>liver>placenta. When the difference between individuals was A>B≧C in the placentas, this order was also kept in the livers.
未公開：P.5以降（別刷論文のため）
研究報告書
一次資料へのリンクURLhttps://u-ryukyu.repo.nii.ac.jp/record/2005291/files/15591236.pdf （fulltext）
連携機関・データベース国立情報学研究所 : 学術機関リポジトリデータベース（IRDB）（機関リポジトリ）