並列タイトル等トキソプラズマ ゲンチュウ ニ トクイテキナ GTP-PK ノ キシツ キョウキュウ ケイロ ノ カイメイ
Tokisopurazuma genchu ni tokuitekina GTP-PK no kishitsu kyokyu keiro no kaimei
Elucidation of the substrate supplying system in Toxoplasma gondii specific GTP-PK
一般注記type:text
トキソプラズマのミトコンドリアとアピコプラストには生理的役割が不明なピルビン酸キナーゼIIが存在する。この酵素の役割を知るためにその基質供給系を検討した。まずPEPCKの遺伝子組み換え体(合計2種類)を作製する実験を行った。遺伝子組み換え体はPCR法によりトキソプラズマRH株のcDNAより増幅し、発現ベクターであるpGEX系に挿入する方法を最初に行った。最後に低温で発現を行うpCold TFベクター系でのPEPCKとの融合タンパク質の発現に成功した。II型のPEPCKは全く検出されなかったが、PCR装置、Taqポリメラーゼ、アニーリング温度を変換するなどの検討を行い、検出に成功した。
A pyruvate kinase II in mitochondria and apicoplast of Toxoplasma gondii has not been known its physiological function. To understand the physiological function of this enzyme, the substrate supplying system of this enzyme was investigated. For the first time, a production of two recombinant PEPCKs was studied. The genes of enzymes were produced by PCR using a cDNA of RH strain of T. gondii and reconstituted into a protein producing plasmid pGEX. Type I gene of PEPCK was recognized, however, type II gene was completely recognized. After several trials to other protein producing plasmid (pET etc.), we found that pCold TF plasmid producing a protein at low temperature could produce the type I recombinant PEPCK as a GST-fusion protein. Since type II PEPCK gene could not been obtained by PCR, we tried several PCR techniques (Taq polymerase, annealing Tm, thermal cycler, etc.). Finally, type II gene was obtained.
研究種目 : 基盤研究(C)
研究期間 : 2011～2013
課題番号 : 23590494
研究分野 : 医歯薬学
科研費の分科・細目 : 基礎医学・寄生虫学(含衛生動物学)
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