並列タイトル等Establishment of Gene Therapy for Advanced Hepatocellular Carcinoma with Intra- and Extra- Hepatic Metastases
タイトル（掲載誌）平成11(1999)年度 科学研究費補助金 基盤研究(B) 研究成果報告書 = 1999 Fiscal Year Final Research Report
一般注記肝内および肝外移転を有する進行肝細胞癌に対する遺伝子治療法を確立するため、Transcriptional targetingを利用した新たなベクターの開発を検討した。肝癌ら特異的に発現しているalfafetoprotein(AFP)のプロモーター領域を改変し、肝癌細胞における発現および移植肝癌における発現を検討した。また治療遺伝子として自殺遺伝子であるherpes simplex virus thymidine kinase遺伝子を用いて担癌マウスにおける抗腫瘍効果を検討した。これらの実験ではtranscriptional tartgetingによる効果が示されたもののAFPプロモーター活性が弱いために十分な治療遺伝子を発現することが出来なかった。そこでCre-loxPシステムを用いて、肝癌に特異的で強力に発現するベクターを作製した。これによって培養細胞およびマウス腫瘍において高い遺伝子発現が得られ、とりわけ肝内および肝外の転移病巣においても十分な発現が得られた。しかしこのCre-loxPの系では2種類のウイルスが同時に感染する必要があり、十分な発現のためにはMOI25以上の力価を要することも示された。こうしたことから投与ベクター量が大量となるため、アデノウイルス投与では問題が生じること示唆され、今後の問題点とされた。これに対し、さらにHVJリポソームといった安全性の高いベクターを用いた検討を行って検討したところ、複数回のベクター投与によって肝内に転移した肝癌を治療することが可能であった。このようにAFP遺伝子を用いたtranscriptional targetingによって肝内および肝外に転移した進行肝癌の治療が可能であることが示唆された。
New therapeutic vectors using transcriptional targeting were made for the treatment of advanced hepatocellular carcinoma with intra- and extra-hepatic metastases. Alpha-fetoprotein (AFP) is well known to be specifically expressed in hepatocellular carcinoma. We modified the promoter region of AFP gene by removal of non-functioning parts and enhancing the enhancer sequences, and put the new controlling element of AFP gene into an adenoviral vector. Therapeutic effect and expression analysis of the vectors was tested in transplanted hepatocellular carcinoma in athymic nude mice. Herpes simplex. virus thymidine kinase gene was used as a therapeutic gene.Effect of transcriptional targeting was demonstrated by the AFP controlling element, the anti-tumor effect was low due to the weak promoter activity. Thus, we introduced cre-loxP system into the vector. By the cre-loxP-AFP system, specific and high expression can be obtained in cultured cells and mouse tumors including intra- and extra-hepatic lesions.However, two viruses need to infect simultaneously a cell, and more than 25 MOI are necessary to enable the system. These results indicate large amount of adenovirus should be introduced in a body, which may cause serious problem in future.When HVJ liposome, which is known to have less toxicity, was used with AFP controlling element, repeated administration of the vector confer significant anti-tumor effect in intra-hepatic metastasis model. Transcriptional targeting using AFP promoter is, thus, promising for the treatment of advanced hepatocellular carcinoma with intra- and extra-hepatic metastases.
研究課題/領域番号:10470132, 研究期間(年度):1998-1999
出典：「肝内および肝外転移を有する進行肝細胞癌に対する遺伝子治療法の確立」研究成果報告書 課題番号10470132 (KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）) 本文データは著者版報告書より作成
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