並列タイトル等Molecular biological research of biological functions of the sphingoshine-1-phosphate receptors
タイトル（掲載誌）平成12(2000)年度 科学研究費補助金 基盤研究(B) 研究成果報告書 = 2000 Fiscal Year Final Research Report
一般注記3種類のG蛋白共役型スフィンゴシン-1-リン酸(S1P)受容体EDG1,EDG3,AGR16(=EDG5)の生物活性、その細胞内情報伝達機構、受容体間の機能上の相異、動物個体レベルでのS1P受容体の役割の解析に取り組んだ。1.EDG1,EDG3,EDG5を発現するCHO株、K562株、HEL株を樹立し、EDG1,3,5がS1P特異的受容体であり、それぞれ異なる情報伝達能を有することを見出した。2.EDG1,EDG3はS1Pに対する化学遊走を媒介するのに対して、EDG5は化学遊走を抑制した。3.S1Pは血管内皮の遊走を誘導し、三次元ゲル内培養下で管腔構造の形成を引き起こした。一方、血管平滑筋細胞では遊走を抑制した。また、血管平滑筋細胞ではPDGF-B遺伝子発現を誘導した。4.EDG1,EDG3はGi,PI3K依存的に低分子量G蛋白質Racを活性化し、これが遊走に必要であった。一方、EDG5は他の化学遊走因子によるRac活性化を強く抑制した。EDG5はPI3K以後に作用し、おそらくGTPase活性化因子(GAP)の活性化を介してRacを抑制していると結論された。EDG5はRacを抑制することが見出された最初の受容体である。5.EDG5のノックアウトマウスを作製中である。既にキメラマウスを作出し、生殖系列細胞に変異を導入したヘテロマウスを樹立する段階にある。6.スフィンゴシンキナーゼノックアウトマウスのターゲティングベクターの構築を完了した。
We performed investigations of cellular activities of three G protein-coupled receptors for sphingosine-1-phosphate (S1P), i.e.EDG1, EDG3 and EDG5, and their transmembrane signaling mechanisms, and functional analysis using the gene targeting technique.1. We established Chinese hamster ovary (CHO), K562 and HEL cell lines that stably express each of EDG1, EDG3 and EDG5 receptors. By using these cells, we found that these receptors are specific for S1P and activate receptor-type specific signaling mechanisms.2. EDG1 and EDG3 mediated chemotaxis, whereas EDG5 uniquely mediated inhibition of cell migration. The latter observation strongly suggests that it is the EDG5 receptor that mediates previously reported inhibitory activities of S1P on various cell types.3. S1P induced capillary-like tube formation of vascular endothelial cells in the 3-dimensional matrigel cultures. S1P induced inhibition of migration of vascular smooth muscle cells. S1P also induced stimulation of platelet-derived growth factor-B chain gene expression.4. EDG1 and EDG3 mediated activation of the small G protein Rac in a manner dependent on Gi and PI-3 kinase. Strikingly, EDG5 mediated inhibition of Rac activation most likely through stimulation of GTPase-activating protein for Rac. EDG5 is the first example of the receptor that is demonstrated to inhibit Rac activity.5. We are trying to generate EDG5-knock-out mice. We successfully generated chimeric mouse.6. We have constructed a targeting vector for generating sphingosine kinase-knock out mice.
研究課題/領域番号:11470014, 研究期間(年度):1999-2000
出典：「生理活性脂質スフィンゴシン-1-リン酸受容体の機能の分子生物学的解析」研究成果報告書 課題番号11470014(KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）) 本文データは著者版報告書より作成
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