並列タイトル等Isolation and characterization of a protein participating in nucleotide excision repair in human cells
タイトル（掲載誌）平成7(1995)年度 科学研究費補助金 一般研究(B) 研究成果報告書概要 = 1995 Fiscal Year Final Research Report Summary
一般注記金沢大学薬学部
UV-damage-specific binding proteins are considered to play important roles in the early steps of DNA repair in human cells irradiated with UV.We have survayd the nuclear and cytoplasmic proteins binding selectively to UV-irradiated DNA.We purifiied one of the binding factors from nuclear extracts to humogeneity, which was designated NF-10. Its molecular weight is - 40kDa. The experimets using photolyases specific for cyclobutane pyrimidine dimer and (6-4) photoproduct revealed that the NF-10 protein binds to UV-DNA though (6-4) photoproducts.By using a monoclonal antibody raised against the NF-10 protein, we could show the existence of the NF-10 protein in all xeroderma pigmentosum complementation group cell lines. This result suggests us that NF-10 is a novel protein different from XPA protein and UV-DNA binding factor previously reported. The immunodepletion of NF-10 protein from cell extract by the antibody decreased the in vitro repair activity, whereas the additon of the protein recovered it.The partial peptide sequences of the protein are almost identical to human glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPD). The purified NF-10 protein exerted the GAPD activuty in glycolysis. These results suggest that the GAPD may play a function in nucleotide excision repair as well as in glycolysis, probably in the damage recognition process.
本研究では、紫外線によって照射されたヒト細胞におけるDNA修復過程をタンパク分子レベルで研究することを目的とした。ヒト細胞核抽出液中から損傷の認識に携わるタンパクを分離するため、紫外線照射されたDNA断片によるゲルシフト法を用いて実験を行った。HeLa細胞核抽出液をヘパリン・カラムで分画したところ、第10番分画(NF-10)に紫外線照射DNAに結合するタンパク分子が存在していた。さらに精製を進めたところ、ポリアクリルアミド電気泳動で約40kDaの分子量を示す単一タンパク分子を得た。この精製NF-10タンパクは、紫外線損傷を有するDNAに特異的に結合した。その結合は紫外線によってDNAに生成された(6-4)光産物を介することが分かった。ついでNF-10タンパクを特異的に認識するモノクローナル抗体を樹立し、試験管内修復系に添加したところ、修復合成が抑制された。また、XPの全ての相補性群細胞抽出液にNF-10タンパクが存在していたことから、このタンパクはこれまでに報告されていない新しい損傷認識タンパクであることが分かった。NF-10タンパクのアミノ酸配列を解析したところ、グリセラデルハイド3'-フォスフェート・デハイドロゲナーゼ(GAPD)と一致した。またNF-10タンパクはGAPD活性を示した。GAPDの補酵素であるNADP^+がNF-10タンパクと紫外線照射DNAとの結合を競合的に阻害したことから、NF-10タンパクはNADP^+分子種を認識すると同様な機構でDNA中の(6-4)光産物を認識していることが示唆された。今後は、NF-10タンパクに結合する関連タンパクの分離を行ない、NF-10タンパクの紫外線損傷修復過程への関与について詳細な解析を行う予定である。
研究課題/領域番号:06454637, 研究期間(年度):1994-1995
出典：研究課題「ヒトにおける紫外線損傷修復機構のタンパクレベルの研究」課題番号06454637（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/report/KAKENHI-PROJECT-06454637/064546371995kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作成
一次資料へのリンクURLhttps://kanazawa-u.repo.nii.ac.jp/?action=repository_action_common_download&item_id=50958&item_no=1&attribute_id=26&file_no=1
関連情報https://kaken.nii.ac.jp/search/?qm=60019669
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06454637/
https://kaken.nii.ac.jp/report/KAKENHI-PROJECT-06454637/064546371995kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/
連携機関・データベース国立情報学研究所 : 学術機関リポジトリデータベース（IRDB）（機関リポジトリ）