バイオアフィニティを利用する多機能バイオセンシングシステムの開発

Material type: 文書・図像類

Author: 清水, 宣明ほか

Publisher: 金沢大学工学部

Publication date: 2001-03-01

Material Format: Digital

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NDC: -

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Note (General)：: 1.微小透析バイオセンサの開発 (1)酸化電流値のグルコース濃度依存性グルコース濃度依存性を調べた結果、酸化電流値はグルコース濃度に比例して増加した。検出限界濃度は0.01mMであり、また5mM以上では直線性が認められなくなった。酵素固定化型の電極と比較して電流値の再現性は優れていた。 (2)溶存...

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Material Type: 文書・図像類
Title: バイオアフィニティを利用する多機能バイオセンシングシステムの開発
Author/Editor: 清水, 宣明
Shimizu, Nobuaki
Author Heading: 清水, 宣明
Shimizu, Nobuaki
Publication, Distribution, etc.: 金沢大学工学部
Publication Date: 2001-03-01
Publication Date (W3CDTF): 2001-03-01
Alternative Title: Bio-affinity Chemical Sensors for in Vivo Monitoring of Bio-active Substances
Periodical title: 平成12(2000)年度科学研究費補助金基盤研究(B) 研究成果報告書 = 2000 Fiscal Year Final Research Report
No. or year of volume/issue: 1998-2000
Volume: 1998-2000
Pages: 76p.-
Text Language Code: jpn
Subject Heading: バイオセンサ
水晶振動子
微小透析
グルコース酸化酵素
免疫センサ
固定化酵素
IgG
生物親和力
biosensor
quartz crystal sensor
microdialysis sensor
glucose oxidase
immunosorbent assay
immobilized enzyme
bio-affinity
Target Audience: 一般
Note (General): 1.微小透析バイオセンサの開発 (1)酸化電流値のグルコース濃度依存性グルコース濃度依存性を調べた結果、酸化電流値はグルコース濃度に比例して増加した。検出限界濃度は0.01mMであり、また5mM以上では直線性が認められなくなった。酵素固定化型の電極と比較して電流値の再現性は優れていた。 (2)溶存酸素依存性と電子メディエータの導入グルコースオキシダーゼはその反応過程で酸素を必要とする。したがって低溶存酸素の状態では、センサの感度が低下する可能性がある。予め窒素ガスをバブリングすることで溶存酸素濃度を低下させた場合、感度の低下と応答時間に対する時定数の増加が見られた。フェロセンを電子メディエータとして白金電極とグルコースオキシダーゼの間に介在させることで、低溶存酸素領域でもセンサの感度を維持することができた。 (3)pHの影響酵素には至適pHがあり、センサの識別素子として用いる場合にはpHの影響を調べる必要がある。そこでグルコースオキシダーゼ溶液をpH=5.6、試料溶液のグルコース濃度を1.0mMに設定し、溶液中のリン酸緩衝液のpH5.6〜8.0まで変化させ、試料溶液中のpHの影響を調べた。その結果、pH5.6から7.5の範囲において試料溶液中のpHの影響を受けないことが明らかとなった。これは、酵素が透析膜によって外液のpH変化から保護されているためと考えられる。 2.水晶振動子を用いた免疫センサの開発 AT-cutの水晶板上に金を蒸着し、ピエゾ圧電効果を利用した超微小量質量測定センサを作製し、電極表面にヤギ抗ヒトIgGを固定化し、IgGの測定について検討した。抗体は金電極表面上にチラミンを電解重合後、チラミン-グルタルアルデヒドー抗体のアミノ基間にシッフ塩を形成させることにより安定に固定化することができた。このセンサの電極質量変化と基本振動数との間には比例関係が成立し、その感度は1ng/Hzであった。各種濃度のヒトIgG溶液に対する免疫センサ応答の経時的変化を調べた結果、IgG投与によって振動数が極めてゆっくりとした時間経過で変化し、IgG50μg/ml投与では約20分後に最大振動数変化が200Hzに達した。
The purpose of this research project was to accomplish the biosensing system which can detect the endogenous chemical substances influencing neuronal activities in the brain. For this purpose, the characteristics of the following sensors were studied ; (1) enzyme microdialysis biosensor and (2) a quarts crystal microbalance biosensor for immunosorbent assay.1. Enzyme microdialysis biosensorThe concentric biosensor was consisted of glass body with a semi-permeable membrane at the tip, working electrode and an inlet and outlet capillary for the perfusion of enzyme solution. The working electrode and the inlet capillary were inserted into a semi-permeable hollow fiber (o.d.=220 μm). The advantage of the biosensor was that the micro-environment around the working electrode could be easily changed by perfusing the enzyme solution. Glucose oxidase was used in this study and steady state response of the sensor was proportional to the glucose concentration up to 5mM.The detection limit of the glucose concentration was 0.01 mM.The decrease in the sensitivity caused by the reduction of dissolved oxygen concentration was overcome by using ferrocene carboxyaldehyde as an electron mediator.2. Quarts crystal microbalance biosensorThe piezoelectric crystals were studied under various operational conditions and were also applied to the determination of human IgG concentration. AT-cut crystals, with a basic resonant frequency of 9 MHz, were modified by immobilizing goat anti-human IgG onto the surface of crystal electrode with tyramine and glutaraldehyde. The immobilization technique improved the long term stability of the biosensor, and the change in frequency caused by the adsorption of material onto the surface of electrode was confirmed to be 1 Hz/ng. The shift in frequency resulting from the reaction of human IgG and goat anti-human IgG correlated with a concentration range of 10μg/ml-50 μg/ml. The suitability of this technique for neurophysiological studies was confirmed for investigation of the chemical fluctuations in vivo.
研究課題/領域番号:10557006, 研究期間(年度):1998–2000
出典：「バイオアフィニティを利用する多機能バイオセンシングシステムの開発」研究成果報告書　課題番号10557006(KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）)　　　本文データは著者版報告書より作成
DOI: 10.24517/00034826
Access Restrictions: 限定公開
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Data Provider (Database): 国立情報学研究所 : 学術機関リポジトリデータベース（IRDB）（機関リポジトリ）
https://irdb.nii.ac.jp
Original Data Provider (Database): 金沢大学 : 金沢大学学術情報リポジトリKURA