大脳皮質特異的なノックアウト動物作成法の開発

Material type: 文書・図像類

Author: 新明, 洋平ほか

Publisher: -

Publication date: 2017-06-01

Material Format: Digital

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Note (General)：: 金沢大学医薬保健研究域医学系本研究では、子宮内エレクトロポレーションとCRISPR/Cas9システムとを組み合わせることにより、大脳皮質特異的な遺伝子ノックアウト法の確立を目指した。マウス大脳皮質にSatb2遺伝子に対するCRISPRコンストラクトを導入し、Satb2の発現を免疫染色により調べた。そ...

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Material Type: 文書・図像類
Title: 大脳皮質特異的なノックアウト動物作成法の開発
Author/Editor: 新明, 洋平
Shinmyo, Yohei
Author Heading: 新明, 洋平
Shinmyo, Yohei
Publication Date: 2017-06-01
Publication Date (W3CDTF): 2017-06-01
Alternative Title: Gene knockout in the cerebral cortex
Periodical title: 平成28(2016)年度科学研究費補助金挑戦的萌芽研究研究成果報告書 = 2016 Fiscal Year Final Research Report
No. or year of volume/issue: 2015-04-01 - 2017-03-31
Volume: 2015-04-01 - 2017-03-31
Pages: 4p.-
Text Language Code: jpn
Subject Heading: 大脳皮質
ゲノム編集
CRISPR/Cas9
Target Audience: 一般
Note (General): 金沢大学医薬保健研究域医学系
本研究では、子宮内エレクトロポレーションとCRISPR/Cas9システムとを組み合わせることにより、大脳皮質特異的な遺伝子ノックアウト法の確立を目指した。マウス大脳皮質にSatb2遺伝子に対するCRISPRコンストラクトを導入し、Satb2の発現を免疫染色により調べた。その結果、Satb2に対するCRISPRコンストラクトが導入された細胞のほとんどで、Satb2の発現が消失していた。これらの結果から、子宮内エレクトロポレーション法を用いたCRISPR/Cas9の導入により大脳皮質神経細胞において効果的に標的遺伝子をノックアウトできることが分かった。
The CRISPR/Cas9 system has recently been adapted for generating knockout mice to investigate physiological functions and pathological mechanisms. Here, we report a highly efficient procedure for brain-specific disruption of genes of interest in vivo. We constructed pX330 plasmids expressing humanized Cas9 and single-guide RNAs (sgRNAs) against the Satb2 gene, which encodes an AT-rich DNA-binding transcription factor. We found that the introduction of pX330-Satb2 into the developing mouse brain using in utero electroporation led to a dramatic reduction of Satb2 expression in the transfected cerebral cortex, suggesting DSBs had occurred in the Satb2 gene with high efficiency. Thus, our procedure combining the CRISPR/Cas9 system and in utero electroporation is an effective and rapid approach to achieve brain-specific gene knockout in vivo.
研究課題/領域番号:15K14332, 研究期間(年度):2015-04-01 - 2017-03-31
DOI: 10.24517/00051775
Source: https://kanazawa-u.repo.nii.ac.jp/?action=repository_action_common_download&item_id=45438&item_no=1&attribute_id=26&file_no=1
https://kanazawa-u.repo.nii.ac.jp/?action=repository_action_common_download&item_id=45438&item_no=1&attribute_id=26&file_no=1
Access Restrictions: 限定公開
Rights (production): CC BY-NC-ND
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https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15K14332/
https://kaken.nii.ac.jp/report/KAKENHI-PROJECT-15K14332/15K14332seika/
Data Provider (Database): 国立情報学研究所 : 学術機関リポジトリデータベース（IRDB）（機関リポジトリ）
https://irdb.nii.ac.jp
Original Data Provider (Database): 金沢大学 : 金沢大学学術情報リポジトリKURA