金属タンパク質中の活性位における超微細電場測定

• Material Type: 文書・図像類
• Title: 金属タンパク質中の活性位における超微細電場測定
• Author/Editor: 横山, 明彦; Yokoyama, Akihiko
• Author Heading: 横山, 明彦; Yokoyama, Akihiko
• Publication, Distribution, etc.: 金沢大学理工研究域物質化学系
• Publication Date: 2006-03
• Publication Date (W3CDTF): 2006-03
• Alternative Title: Measurement of electric field gradient at the metal sites in proteins
• Periodical title: 平成17(2005)年度 科学研究費補助金 基盤研究(C) 研究成果報告書 = 2005 Fiscal Year Final Research Report
• No. or year of volume/issue: 2004-2005
• Volume: 2004-2005
• Pages: 68p.-
• Text Language Code: jpn
• Subject Heading: ガンマ線摂動角相関法; マビシアニン; カドミウム-117; 水素イオン濃度依存性; 銅タンパク質; 電場勾配; 金属キレート; perturbed angular correlation; mavicyanin; cadmium-117; pH; copper protein; field gradient; metal chelate
• Target Audience: 一般
• Note (General): ガンマ線摂動角相関(PAC)法は、物質中のプローブ核に加えられる外場の情報を得ることで,その核の属する原子付近の電子状態や物質の構造を探ることができる。この手法は適応される測定試料の状態に制限されることなく液体状態でも超微細場測定が可能である。この特長を生かして近年構造と機能が注目されているタンパク質への適用を考えた。本研究では,溶液中の状態についての情報を得るために生体分子の活性中心での超微細場測定をPAC法で試みた。マビシアニン野生型と変異型(Thrl5Ala-Mav)を測定試料に選び,このマビシアニン中の銅の位置にPACプローブ親核である^<117>Cd(半減期2.5h)を入れ,水溶液中のpHに対するマビシアニンの銅活性部位における超微細場測定を行った。その結果pH6.0-8.0の範囲では、野生型マビシアニンについて活性部位の電場勾配V_<zz>は1.48〜2.08×10^<22>V・m^<-2>であるのに対し、変異型では0.43〜1.49×10^<22>V・m^<-2>という値になった。変異型の値はいずれも対応するpHの野生型に比較して低い値になった。また,pH6と7.5の間での電場勾配の急激な変化は同様に見られた。電場勾配の比較より,野生型と変異型の間で何らかの構造の変化があったと考えられる。変異型は野生型の15位トレオニンをアラニンに置換したもので酸化還元電位の変動が確認されている。さらに詳しくその変化について議論を進めるために,活性部位周りの元素と似ている様々な配位子から作ったオキシンなど5種類の錯体に関する電場勾配を求める同様の実験を行った。また,PACプローブ核の依存性をみるために^<117>Cd以外にプローブ親核として^<111m>Cd,^<111>Inの測定を行った。これらのデータから,同じ化合物でもプローブ核を変えた場合では電場勾配が違っていることがわかった。これはプローブ核の元素自体か壊変過程における後遺効果の違いであると考えられる。また,測定した錯体の電場勾配値はマビシアニンの電場勾配値に比べるとほとんどは低いものであったが、キノリン-8-カルボン酸錯体はマビシアニンに近い値を与えることがわかった。これらのデータはタンパク質中の金属に対する配位の特異性を示唆している一方で、キノリン-8-カルボン酸錯体の配位構造との類似が示唆される。タンパク質の配位構造を考えるためにもこれらの配位子についてさらに詳しい検討をする必要があると考えられる.; The structure around the metal site of mavicyanin, a protein molecule with a copper site, was investigated by using time-differential perturbed angular correlation of γ-rays related to a metastable state of ^<117>In. Its parent nuclei of ^<117>Cd are subjected to β^- decay to populate the 749 keV excited state of ^<117>In with a half-life t_<1/2>=2.49 h, decaying to the 315 keV excited state through the 660 keV intermediate state having a spin I= 3/2, t_<1/2>=53.6 ns, and an electric quadrupole moment Q=(-)0.59(1) b. The parent nuclei ^<117>Cd were obtained by irradiating enriched ^<116>CdO (96.53%) for about 30 min in thermal neutron flux of 1.93×10^<13> cm^<-2>s^<-1> or 2.34×10^<13> cm^<-2>s^<-1> at Kyoto University Research Reactor Institute. The Cd ions from solution of the irradiated sample were substituted in the metal sites of mavicyanin, from which Cu ions were extracted beforehand. The sample solution was subjected to PAC measurements.The field gradient values were determined from the PAC spectra of wild-type mavicyanin for pH=6.0, 7.5 and 8.0 to be 1.48×10^<22> to 2.08×10^<22> Vm^<-2>, while those of a mutant-type mavicyanin, Thr15Ala-Mav, were 0.43×10^<22> to 1.49×10^<22> Vm^<-2>. Compared with the value, 1.71×10^<22> Vm^<-2> reported on stellacyanin, the results obtained in this work seem to be reasonable. It was also found that there is a steep change of the gradient between 6.0 and 7.5 in pH for both of the proteins. In order to clarify the relevant change of the proteins in structure, several metal chelates were subjected to the PAC measurement as described above for comparison. In addition to that, additional parent nuclides of Cd-111m and In-111 decaying to PAC probes were used for the experiment for comparison as well. The latter experiment demonstrated that there is clear difference between proteins and metal chelates in gradient fields probably due to coordination of relevant ligands and that there is dependence of the used probes in measurement of the gradients.; 研究課題/領域番号:16550052, 研究期間(年度):2004-2005; 出典：「金属タンパク質中の活性位における超微細電場測定」研究成果報告書 課題番号16550052 (KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）) 本文データは著者版報告書より作成
• DOI: 10.24517/00052613
• Source: https://kanazawa-u.repo.nii.ac.jp/?action=repository_action_common_download&item_id=46280&item_no=1&attribute_id=26&file_no=1
• Access Restrictions: 限定公開
• Rights (production): CC BY-NC-ND
• Related Material: https://kaken.nii.ac.jp/search/?qm=80230655; https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16550052/; https://kaken.nii.ac.jp/report/KAKENHI-PROJECT-16550052/165500522005kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/
• Data Provider (Database): 国立情報学研究所 : 学術機関リポジトリデータベース（IRDB）（機関リポジトリ）; https://irdb.nii.ac.jp
• Original Data Provider (Database): 金沢大学 : 金沢大学学術情報リポジトリKURA