細胞膜受容体の分子挙動と細胞応答の統合的測定技術の開発

Material type: 文書・図像類

Author: 渡邉, 琢夫ほか

Publisher: -

Publication date: 2018-03-28

Material Format: Digital

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Note (General)：: 金沢大学医薬保健研究域医学系1.細胞表面受容体のオリゴマー化モニタリング系の開発細胞膜受容体であるRAGE (receptor for advanced glycation endproducts)をモデルとし、2分子FRET法により受容体オリゴマー化をモニタリングする技術を確立した。これにより、受...

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Material Type: 文書・図像類
Title: 細胞膜受容体の分子挙動と細胞応答の統合的測定技術の開発
Author/Editor: 渡邉, 琢夫
Watanabe, Takuo
Author Heading: 渡邉, 琢夫
Watanabe, Takuo
Publication Date: 2018-03-28
Publication Date (W3CDTF): 2018-03-28
Periodical title: 平成18(2006)年度科学研究費補助金特定領域研究研究実績の概要 = 2006 Research Project Summary
No. or year of volume/issue: 2006
Volume: 2006
Pages: 2p.-
Text Language Code: jpn
Subject Heading: FRET
細胞膜受容体
オリゴマー化
RAGE
1分子FRET
NFκB
Target Audience: 一般
Note (General): 金沢大学医薬保健研究域医学系
1.細胞表面受容体のオリゴマー化モニタリング系の開発細胞膜受容体であるRAGE (receptor for advanced glycation endproducts)をモデルとし、2分子FRET法により受容体オリゴマー化をモニタリングする技術を確立した。これにより、受容体の蛍光タンパク融合組換え体を作製することなくFRETでオリゴマー化をモニタリングすることが可能となった。(1)RAGE細胞外ドメインに結合し、かつRAGEとリガンドとの結合を阻害しないモノクローナル抗体を作製し、FRETのドナーとアクセプターの対をなす2種の蛍光色素で標識した。(2)RAGE過剰発現細胞株の培養液中に上記の2種の蛍光標識抗体を加え、生細胞表面のRAGEを蛍光標識し、RAGEのオリゴマー化をFRETシグナルの変化を測定することによりモニタリングした。(3)その結果、リガンド刺激後20分をピークとするFRETシグナルの上昇が検出され、本技術の有効性が示された。2.1分子FRET法による細胞内シグナルモニタリングと受容体発現量の相関関係の解析細胞内シグナル強度のモニタリングと、受容体の発現量解析を同時に行うことにより、受容体発現量とシグナル強度の相関解析が可能な系を開発した。(1)NFκBの活性化によりβ-ラクタマーゼを発現するレポーター遺伝子を組み込んだ細胞株に、RAGE発現ベクターを導入した。(2)上記細胞にβ-ラクタマーゼによる分解で分子内FRETが消失する蛍光色素分子を取り込ませ、FRETシグナルによりNFκB活性化を検出すると同時に、蛍光抗体でRAGEを標識し発現量を測定した。(3)その結果、RAGE発現量が中程度の細胞において最も強くNFκBが活性化されており、発現量が過剰な細胞ではむしろ活性化の程度が低いことが明らかとなった。
研究課題/領域番号:18038017, 研究期間(年度):2006
出典：「細胞膜受容体の分子挙動と細胞応答の統合的測定技術の開発」研究成果報告書　課題番号18038017（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-18038017/)を加工して作成
DOI: 10.24517/00060174
Source: https://kanazawa-u.repo.nii.ac.jp/?action=repository_action_common_download&item_id=53894&item_no=1&attribute_id=26&file_no=1
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Original Data Provider (Database): 金沢大学 : 金沢大学学術情報リポジトリKURA