立体構造解析に基づくWASP・WAVEファミリータンパク質の機能制御

Material type: 文書・図像類

Author: 置塩, 信行ほか

Publisher: -

Publication date: 2016-04-21

Material Format: Digital

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Note (General)：: 金沢大学医薬保健研究域医学系アクチン重合を制御し、細胞骨格構築に関与するN-WASP [neural-WASP (Wiskott-Aldrich syndrome protein)]およびWAVE(WASP family verprolin-homologous protein)の活性制御メカニズム...

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Material Type: 文書・図像類
Title: 立体構造解析に基づくWASP・WAVEファミリータンパク質の機能制御
Author/Editor: 置塩, 信行
Okishio, Nobuyuki
Author Heading: 置塩, 信行
Okishio, Nobuyuki
Publication Date: 2016-04-21
Publication Date (W3CDTF): 2016-04-21
Periodical title: 平成17(2005)年度科学研究費補助金若手研究(B) 研究概要 = 2005 Research Project Summary
No. or year of volume/issue: 2003 – 2005
Volume: 2003 – 2005
Pages: 2p.-
Text Language Code: jpn
Subject Heading: 情報伝達
分子認識
SH3ドメイン
Target Audience: 一般
Note (General): 金沢大学医薬保健研究域医学系
アクチン重合を制御し、細胞骨格構築に関与するN-WASP [neural-WASP (Wiskott-Aldrich syndrome protein)]およびWAVE(WASP family verprolin-homologous protein)の活性制御メカニズムを明らかにするために、それらの調節因子WISH(WASP interacting SH3 protein)、Endophilin、IRSp53(insulin receptor substrate p53)のSH3ドメインに注目し、これらSH3ドメインの大腸菌を用いた大量発現・精製系の構築を試みた。いずれのSH3ドメインも、GSTタグを付加する発現プラスミドの構築には問題がなかった。しかしながら、WISH SH3では、発現タンパク質の大部分が不溶性であり、Endophilin SH3では、Cys残基を含むためか、発現タンパク質の一部が、非還元状態で二量体化しており、いずれの場合も、以後の実験に用いるには適さなかった。またEndophilin SH3では、Cys残基をSer残基に置換した変異体を作成したが、変異によって可溶性が低下するため、大量発現・精製には不向きであった。一方、IRSp53 SH3では、Cys残基を含まず、充分量の可溶性タンパクを得ることができた。ファージディスプレイライブラリー法を用いて、IRSp53 SH3が認識する配列を調べたところ、NRPVAPPLPFWLの配列を得た。CDを用いて、IRSp53 SH3と合成ペプチドAc-NRPV APPLPFWL-NH_2の親和性(Kd値)を調べたところ、約20-40μMであった。NMRを用いて、IRSp53 SH3の^<15>N-^1H HSQCスペクトルを測定したところ、残基間でシグナル強度の不均一が見られたため、残念ながら、構造決定を行うことができなかった。
研究課題/領域番号:15790147, 研究期間(年度):2003 – 2005
出典：「立体構造解析に基づくWASP・WAVEファミリータンパク質の機能制御」研究成果報告書　課題番号15790147（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-15790147/)を加工して作成
DOI: 10.24517/00061085
Source: https://kanazawa-u.repo.nii.ac.jp/?action=repository_action_common_download&item_id=54809&item_no=1&attribute_id=26&file_no=1
https://kanazawa-u.repo.nii.ac.jp/?action=repository_action_common_download&item_id=54809&item_no=1&attribute_id=26&file_no=1
Access Restrictions: 限定公開
Rights (production): CC BY-NC-ND
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https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-15790147/
Data Provider (Database): 国立情報学研究所 : 学術機関リポジトリデータベース（IRDB）（機関リポジトリ）
https://irdb.nii.ac.jp
Original Data Provider (Database): 金沢大学 : 金沢大学学術情報リポジトリKURA