エクジソン膜受容体の分子特性と機能

Material type: 文書・図像類

Author: 桜井, 勝ほか

Publisher: -

Publication date: 2010-02-03

Material Format: Digital

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Note (General)：: 金沢大学大学院自然科学研究科Genomic作用に関しては、20E応答初期遺伝子の発現動態の全貌をin vivo及びin vitroで明らかにした。mEcRのクローニングは、受容体を活性を保ったまま可溶化できたが、タンパク精製、単抗体作成の両面から進めた結果、いずれも成功に至らなかった。2007年度か...

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Digital

Material Type: 文書・図像類
Title: エクジソン膜受容体の分子特性と機能
Author/Editor: 桜井, 勝
Sakurai, Sho
Author Heading: 桜井, 勝
Sakurai, Sho
Publication Date: 2010-02-03
Publication Date (W3CDTF): 2010-02-03
Alternative Title: Molecular characterization and role of ecdysone membrane receptor
Periodical title: 平成19(2007)年度科学研究費補助金基盤研究(B) 研究成果報告書 = 2007 Fiscal Year Final Research Report Summary
No. or year of volume/issue: 2005 – 2007
Volume: 2005 – 2007
Pages: 5p.-
Text Language Code: jpn
Subject Heading: カイコガ
予定細胞死
20-ヒドロキシエクジソン
シグナル伝達
sienal transduction
silk worm
Bombyx mori
programmed cell death
20-hydroxyecdysone
Target Audience: 一般
Note (General): 金沢大学大学院自然科学研究科
Genomic作用に関しては、20E応答初期遺伝子の発現動態の全貌をin vivo及びin vitroで明らかにした。mEcRのクローニングは、受容体を活性を保ったまま可溶化できたが、タンパク精製、単抗体作成の両面から進めた結果、いずれも成功に至らなかった。2007年度からはカイコガゲノムデータベースから可能性のあるGPCRを網羅的に拾い出し、そのすべてに対しての発現解析をRT-PCRにより行っている。可能性のあるGPCRは100数十であり、ほぼ半数の解析を終了したが、未だに候補遺伝子を推定するには至っていない。想定される20E膜受容(mEcR)体の下流にあるシグナル伝達経路の検証を行い、以下のような、その全体を概観しうる結果を得た。mEcRはおそらくGタンパク質共役型(GPCR)であり、Gqサブユニットが共役している。次いで、phospholipase C-βの活性化、inositol 3-phosphate(IP3)の生成と続き、これがセカンドメッセンジャーとして働く。IP3は小胞体(ER)のIP3受容体に結合し、Ca^<2+>の細胞内濃度上昇を促し、protein kinase C(PKC)の活性化を介してカスパーゼ3を活性化し、核とDNAの断片化に至る。一方、核の膨潤は、この経路とは異なり、カルモジュリン-CaMKIIの経路による。ただし、CaMKIIの活性化はCa^<2+>非依存的であり、Gβγ-DG経路による可能性はあるが、その機構は不明であり、残された課題である。また、カスパーゼ3の活性化は、PKC阻害剤でもCaMKII阻害剤でも抑制されること、細胞形体の変化もCaMKII阻害剤で抑制されることから、細胞死はPKCとCaMKIIの二重支配下にあるものとされた。
We clarified developmental profiles of gene expression of early response genes to 20E in the anterior silk glands during the fifth instar up to the time of cell death execution two days after gut purge. Also, we showed the gene response to 20E in vitro using anterior silk glands of gut-purged larvae. The in vivo and in vitro results indicated that a heterodimeric EcR-B1 and USP-2 may be responsible for the cell death Results also indicated involvement of E74, E75, BHR3 and BR-C isoforms, but not Ftz-F1. We are not succeeded in gene cloning of the putative membrane ecdysone receptor yet. We examined pharmacologically the signaling pathway from mEcR to cellular responses, i.e. cell condensation, nuclear condensation, DNA fragmentation and nuclear fragmentation. Ca<2+> acts as the second messenger The mEcR is suggested to be a G-protein coupled receptor (GPCR) associated with Gαq, followed by a serial activation of phospholipase c-β, generation of inositol 3-phosphate (IP_3), and release of Ca<2+> from endoplasmic reticulum probably through IP3 receptor Then, Ca<2+> activates protein kinase C (PKC) and caspase 3-like protease. This signaling pathway culminates in nuclear fragmentation and nuclear fragmentation. Nuclear condensation is regulated by a different pathway involving calmodulin and calmodulin-dependent protein kinase II (CaMK-II). However, this pathway was not activated by Ca<2+>, and therefore it is unknown whether Gαq is involved in this pathway. In addition, inhibitors of calmodulin and CaMK-II affected the occurrence of nuclear and DNA fragmentations, indicating the caspase 3-like protease activation does not depend simply on the signaling pathway of GPCR/PLC-β/IP3/Ca<2+>/PKC.
研究課題/領域番号:17380035, 研究期間(年度):2005 – 2007
出典：研究課題「エクジソン膜受容体の分子特性と機能」課題番号17380035（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-17380035/173800352007kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作成
DOI: 10.24517/00059831
Access Restrictions: 限定公開
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https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-17380035/
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Data Provider (Database): 国立情報学研究所 : 学術機関リポジトリデータベース（IRDB）（機関リポジトリ）
https://irdb.nii.ac.jp
Original Data Provider (Database): 金沢大学 : 金沢大学学術情報リポジトリKURA