突然変異細胞を用いた放射線によるアポトーシス誘導機構の解析

Material type: 文書・図像類

Author: 鈴木, 文男ほか

Publisher: -

Publication date: 1999-03-08

Material Format: Digital

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Note (General)：: 金沢大学医原爆放射能医学研究所アポトーシスは、放射線や各種化学薬剤によって誘導される多細胞生物が持っている本質的な機構である。そこで本研究では、アポトーシスに高い感受性を示すマウス胸腺リンパ腫由来細胞(3SB細胞)より放射線抵抗性細胞を分離し、これらの変異細胞を用いて放射線によるアポトーシス誘導機構...

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Material Type: 文書・図像類
Title: 突然変異細胞を用いた放射線によるアポトーシス誘導機構の解析
Author/Editor: 鈴木, 文男
Suzuki, Fumio
Author Heading: 鈴木, 文男
Suzuki, Fumio
Publication Date: 1999-03-08
Publication Date (W3CDTF): 1999-03-08
Alternative Title: Analysis of radiation-induced apoptosis using radioresistant mutants
Periodical title: 平成8(1996)年度科学研究費補助金基盤研究(C) 研究成果報告書概要 = 1996 Fiscal Year Final Research Report Summary
No. or year of volume/issue: 1995 – 1996
Volume: 1995 – 1996
Pages: 3p.-
Text Language Code: jpn
Subject Heading: マウス
胸腺リンパ腫
X線
突然変異細胞
アポトーシス
放射線抵抗性
PCR-SSCP解析
p53遺伝子
Mouse
Thymic lymphoma
X-rays
Mutant
Apoptosis
Radioresistant
PCR-SSCP analysis
p53 gene
Target Audience: 一般
Note (General): 金沢大学医原爆放射能医学研究所
アポトーシスは、放射線や各種化学薬剤によって誘導される多細胞生物が持っている本質的な機構である。そこで本研究では、アポトーシスに高い感受性を示すマウス胸腺リンパ腫由来細胞(3SB細胞)より放射線抵抗性細胞を分離し、これらの変異細胞を用いて放射線によるアポトーシス誘導機構について解析した。3SB細胞に突然変異誘発剤(EMS)を処理し、X線を繰り返し照射することにより12種のクローンを分離し、さらに選択濃縮あるいはリクローニングすることにより、5種の安定なX線抵抗性クローンを得た。3SB細胞はX線感受性が高く、5Gy照射後8時間で死細胞が出現した。しかし、最も高い抵抗性を示したひとつのクローン(1B1C4細胞)では24時間経過しても死細胞は観察できなかった。このことはアポトーシスに特徴的なDNAの断片化反応おいても確認された。既に、がん抑制遺伝子p53が放射線誘発アポトーシスに関与していることが報告されているので、5種のアポトーシス抵抗性細胞についてp53遺伝子のホットスポット領域における変異の有無を調べた。まずRT-PCR-SSCP解析を行ったところ、3SB細胞と3種の抵抗性細胞では正常マウス細胞と同じDNA泳動パターンを示したが、1B1C4細胞と1D5-8細胞では変異の存在が示唆された。特に1B1C4細胞では、PCRダイレクトシークエンス法によりコドン238においてセリンからフェニルアラニンへの変異が検出されたことから、p53の機能の欠損が示唆された。実際、ウエスタンブロティングで見るかぎり、1B1C4細胞は長寿命の変異型p53蛋白質を産生しており、またp53特異的なDNA結合配列への結合能も失っていることがわかった。一方、他の4種の細胞では正常型のp53蛋白質を産生するので、放射線誘発アポトーシスにはp53に依存する経路と非依存性の経路があることが明らかとなった。
Apoptosis is an important physiological process that can be activated by various physical and chemical stimuli such as ionizing radiation and various chemicals. In order to analyze molecular mechanism of radiation-induced apoptosis, we isolated apoptosis-resistant mutants from a radiosensitive mouse thymic lymphoma 3SB cell line following treatment with ethyl methanesulfonate (EMS). After enrichment by repeated X-irradiation, EMS treated cells were grown in a semi-solid medium containing 0.25% agar, and 12 independent colonies were isolated. These clonal cell lines were cultured in a liquid medium for a few weeks and then inoculated into the semi-solid medium following irradiation with 5 Gy X-rays, to isolate more stable radioresistant mutants. We finally obtained 5 stable cell lines and found that one clone, 1B1C4, is more resistant to X-ray-induced apoptotic cell death than other clones. When 3SB cells were exposed to 5 Gy of X-rays, the fraction of cells stained with erythrosin B increased quickly within 8 h of incubation following irradiation. However, no such apoptosis occurred in 1B1C4 cells, even after incubation for 24 h. Similar radioresistance was observed using agarose gel electrophoresis of DNA from X-irradiated 1B1C4 cells. PCR-SSCP analysis of p53 cDNA fragments containing exons 5 to 9 suggested that two clones, 1B1C4 and 1D5-8 cells, contain a mutant p53 gene. PCR direct sequence analysis revealed that 1B1C4 cells have a transition from C to T in the second position of p53 codon 238. This mutation was found to cause a functional defect in the p53 protein as revealed by the sequence-specific DNA binding assay. These results indicate that the process of radiation-induced apoptosis in the mouse thymic lymphoma cell line may take at least two routs, p53-dependent or -independent pathways.
研究課題/領域番号:07680576, 研究期間(年度):1995 – 1996
出典：研究課題「突然変異細胞を用いた放射線によるアポトーシス誘導機構の解析」課題番号07680576（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-07680576/076805761996kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作成
DOI: 10.24517/00066292
Source: https://kanazawa-u.repo.nii.ac.jp/?action=repository_action_common_download&item_id=60041&item_no=1&attribute_id=26&file_no=1
https://kanazawa-u.repo.nii.ac.jp/?action=repository_action_common_download&item_id=60041&item_no=1&attribute_id=26&file_no=1
Access Restrictions: 限定公開
Rights (production): CC BY-NC-ND
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https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07680576/
https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-07680576/076805761996kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/
Data Provider (Database): 国立情報学研究所 : 学術機関リポジトリデータベース（IRDB）（機関リポジトリ）
https://irdb.nii.ac.jp
Original Data Provider (Database): 金沢大学 : 金沢大学学術情報リポジトリKURA