Title Transcriptionガン サンソ タカン ホウコウゾク タンカ スイソルイ ノ ヒメダカ ハイチュウ タイシャ カクラン ト キケイ ユウハツ ニ カンスル ケンキュウ
Alternative TitleDisturbance to metabolic profiles and malformation in Japanese medaka embryos exposed to oxygenated polycyclic aromatic hydrocarbons
Note (General)博士論文全文, 博士論文要旨(日本語), 博士論文要旨(English), 最終試験結果の要旨, 論文審査の要旨
含酸素多環芳香族炭化水素類（ oxyPAHs ）は、酸素原子がベンゼン環と二重結合により結合した構造を持つ。 oxyPAHs は自動車などの排気ガスから直接大気に排出される他、多環芳香族炭化水素類が光や微生物等によって酸化されて生成する。そのため大気中のみならず、河川水や底質の水環境や貝類などの水生生物中からも検出される。しかし、 oxyPAHs の影響は哺乳類に対する知見がほとんどであり、水生生物に対してはあまり分かっていない。本研究では、化学物質に対して感受性が高い魚類胚にoxyPAHs を暴露し、胚または孵化後の仔魚が受ける影響を顕微鏡観察などによって詳細に調べると共に、暴露された胚の発生段階における代謝物変動およびその攪乱をとらえて、観察された個々の影響と代謝物変動の関連性から、奇形仔魚誘発など、oxyPAHs によって引き起こされる魚胚への影響メカニズムの解明を目的とした。本研究では主に4 種類の oxyPAHs を対象とし、まずヒメダカ胚に水暴露したときの影響を顕微鏡下で観察した。その結果、個々の oxyPAHs に依存した特異的な影響と、全 oxyPAHs に共通した影響に大別された。胚の卵黄の陥没、油球の黒化、発生の遅延及び停止などは特定の物質にのみ見られた影響であるが、孵化仔魚のブルーサック症候群（管状心臓や水 浮腫、頭蓋の委縮等）はどの oxyPAHs 暴露でも共通して観察された。胚への影響をさらに詳しく調べるためにoxyPAHs暴露した胚の生体内代謝に対する影響をメタボロミクス解析により調べた。その結果、アスコルビン酸やヒドロキシプロリンの変動からコラーゲン形成に対する影響を始めとする様々な影響が生じていたのではないかと予測された。これらの影響が実際に胚中あるいは孵化仔魚で起こっているか、検証を進めた。コラーゲンは軟骨を形成する主成分であることから、oxyPAHsが軟骨形成に何らかの影響を与えているのではないかと予測して、oxyPAHsを暴露した胚から孵化した仔魚の軟骨形成不全を調べたところ、頭部や尾部の軟骨欠損が認められた。また、胚中コラーゲン中のヒドロキシプロリンの減少も確認されたことから、oxyPAHs暴露によりコラーゲン生成が正常に行えず、軟骨形成不全が起こっていることが示唆された。その他にグルタミン酸やアスパラギン酸などの変動から過剰なアンモニア生成が予測され、oxyPAHsに暴露された胚中アンモニア量を実際に測定したところ有意な上昇を確認した。本研究ではその他にも、oxyPAHs暴露された胚中の過酸化脂質やカルボニル化タンパク質といった、酸化ストレスマーカーの有意な上昇を確認し、暴露によって脂質やタンパク質が酸化損傷（酸化ストレス）を受けていたことを見出した。また、oxyPAHsが暴露された胚中では、oxyPAHsが明らかにCYP1Aの代謝を受けていることを確認した。
Oxygenated polycyclic aromatic hydrocarbons (oxyPAHs) are directly discharged into the atmosphere with exhaust gas from the diesel engine automobiles and industries, and are also generated through photo oxidation and/or microbial metabolism of pare nt polycyclic aromatic hydrocarbons. Because oxyPAHs have diversity of forming process, they distribute widely in environment and are not exception in aquatic environment. They are already known to cause the gen e toxicities in fish embryos. However, the st udies for their toxicities to aquatic organisms have been limited, although several effects of them to mammals were already well known. Therefore, in the present study, we examined the effects to Japanese medaka Oryzias latipes ) embryos exposed to 4 indiv iduals of oxyPAHs by the observations with microscope, metabolomics approach, and biochemical method. At last, the affected mechanisms in the embryos exposed to oxyPAHs and larvae were also explored.The embryos exposed to individual oxyPAH showed the char acteristic effects with each substance dependence; for example, caving in yolk sac, blackened oil droplet, and underdevelopment in medaka embryos. The exposures of any oxyPAHs also caused the poor development of cephalic part, unabsorbed and hypertrophied yolk sac, tubular heart as blue--sac syndrome and other symptoms. These effects for the hatching larvae were too serous to swim well.Metabolomics approach with GC/MS predicted that ascorbic acid and hydroxyproline, which are absolutely essential components for the collagen synthesis, decreased in the embryos exposed to oxyPAHs. In fact, poor formations of the cartilage were confirmed especially in the cephalic and caudal part of hatching larvae. Hydroxyproline composed collagen also decreased, and could form the deficient collagen in the embryos. Metabolomics also suggested that the excess ammonia existed in embryos exposed to oxyPAHs. This phenomenon was also confirmed by the in embryos exposed to oxyPAHs. This phenomenon was also confirmed by the measurement of ammonia in the embryos. Excess ammonia can cause the serious toxicitoxicities in organisms. The embryos exposed to oxyPAHs could affect to the ammonia, and cause the severe effects including deformations in the hatching larvae.The present study could show that the embryos exposed to oxyPAHs were induced the oxidative stress in lipid and protein. These oxidative stresses could also cause the serious effects in embryos exposed to oxyPAHs. In addition, we could confirm that oxyPAHs could be metabolized by CYP1A. Until now, although the possibilities of xenobiotics metabolism by embryos were not well-known, their oxidative metabolism possibly causes the gene toxicities even in fish embryos.
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Date Accepted (W3CDTF)2019-09-07T00:28:35+09:00
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